碧云天生产的AO/PI细胞活性检测试剂盒(荧光显微镜专用)，即AO/PI Cell Viability Assay Kit for Fluorescence Microscope，是由吖啶橙(Acridine orange, AO)染色液和碘化丙锭(Propidium iodide, PI)染色液优化比例混合而成，基于DNA探针双染细胞核，快速、便捷检测细胞活性的试剂盒。

AO是经典的、极灵敏的特异染性荧光染料，可以标记DNA、RNA。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使DNA和RNA染色，因此AO常用于细胞内DNA和RNA的荧光染色检测。AO与核酸结合方式主要有两种，分别为插入性结合和静电吸引。插入性结合是指AO嵌入DNA双链的碱基对之间，荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光。静电吸引是指带正电荷的AO与RNA或单链DNA的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。本试剂盒中AO与核酸结合的方式是插入性结合，因此激发后呈绿色荧光。经AO染色后，正常细胞的细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，AO使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

PI是一种非细胞膜通透性荧光染料，与DNA结合后的最大激发光波长为535nm，最大发射光波长为617nm，不能穿过具有生物活性的细胞质膜，只能对于坏死细胞因为其细胞膜缺乏完整性而能到达细胞核[1, 2]，并嵌入坏死细胞的DNA双螺旋形成PI-DNA复合物从而产生红色荧光，因此PI仅能对坏死细胞染色，因此被用来区分正常细胞与坏死细胞。须特别注意凋亡细胞会因为其细胞膜的完整性，而无法被PI染色，仅在凋亡后期发生继发性坏死(Secondary necrosis)时，才能被PI染色。

图1. 碧云天AO/PI细胞活性检测试剂盒(荧光显微镜专用) (C2017)对HeLa细胞染色的效果图。图中绿色荧光表示活细胞，红色荧光表示坏死细胞。实际效果会因实验条件、操作等而存在一定差异，本图仅供参考。

本试剂盒操作简单，检测速度快。本试剂盒提供即用型的AO/PI细胞活性检测试剂，使用时，仅需取适量与细胞样品混合即可。无需制备和稀释各种溶液的繁琐过程，免去制备和稀释过程中可能产生的误差，提高了检测的精确度。

以96孔板为例，按照每个样品使用100μl AO/PI细胞活性检测试剂计算，本试剂盒每1ml可以进行10次检测。

4ºC避光保存，一年有效。-20ºC避光保存，可以保存更长时间。室温避光保存，一个月有效。

荧光染料均存在淬灭问题，请注意避光，以减缓荧光淬灭。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。