022174 抗生素检定培养基2号(高pH)

Antibiotic Agar No.2(high pH)

用 途：

抗生素检定培养基2号(高pH)用于磷霉素、大观霉素、新霉素、罗红霉素等效价及残留的微生物学检定(中华人民共和国药典2010版)。

原 理：

本法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，抑菌圈直径与抗生素的浓度或活性有关;比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种微生物学方法。

配方(每升)：

胨 6g

葡萄糖 1g

牛肉膏粉 1.5g

酵母膏粉 6g

琼脂 15g

最终pH 7.9±0.1

使用方法(管碟法)：

1、称取抗生素检定培养基2号(高pH)29.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌30min。

2、双碟的制备应在无菌室或洁净室内进行，并注意避免微生物及抗生素污染。培养基应在水浴中或微波炉内融化，避免直火加热。

3、双碟的底层：用灭菌大口20mL吸管或其它灭菌分装器，吸取已融化的培养基20mL注入双碟内，待凝固后加入菌层。(双碟内的培养基应均匀的分布于平皿内。)

4、菌层：取出试验用菌悬液，按预试好的加菌量[能得清晰的抑菌圈为度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18~22mm，三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15~18mm]，用灭菌吸管吸取菌悬液适量，加入已融化并保温在水浴中(水浴温度：细菌为48~50℃，芽孢可至60℃)的培养基内，摇匀，作为菌层培养基使用。取出加有底层培养基的双碟，用灭菌大口5mL、10mL吸管或其他适宜分装器，吸取菌层培养基5mL，加于底层培养基上，使其均匀摊布，等凝固后放置钢管。

5、放置钢管：使用钢管放置器或小眼科镊子，使钢管平稳的落在培养基上，相应剂量的钢管 对角均匀放置。钢管放妥后，双碟静置5~10分钟后，再开始滴加抗生素溶液。

6、滴加抗生素溶液用灭菌毛细滴管或微量加样器(调节加样量约为200-300μL)，在滴加之前用溶液洗2~3次。滴加标准品及供试品溶液顺序，因实验设计方法不同而异。(2.2)法，在双碟的4个钢管中分别成“Z”字形滴加标准品及供试品高、低两种浓度的溶液;在(3.3)法的6个钢管中间隔3个钢管中分别滴加标准品及供试品高、中、低3种浓度，并使相同浓度成对角。滴加溶液至钢管口平满。注意滴加时间溶液的间隔不可过长。

7、滴加完毕，用陶瓦盖覆盖双碟，平稳置于双碟托盘内，双碟叠放不可超过3层，将双碟托盘水平平稳地移入培养箱中间位置，在35~37℃或该药品标准规定的温度下培养至所需时间。

8、抑菌圈测量：测量前应检查抑菌圈是否圆整，如有破圈或圈不圆整，应舍弃该碟。可用抑菌圈测量仪或游标卡尺测量。

质量控制：

本品在灭菌后应澄清无沉淀，下列菌株接种后35~37℃培养16~18h生长情况如下表：

贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。

规 格：250g

参考文献：

1. 《中华人民共和国药典》2010年版，附录XI A 抗生素微生物鉴定法。